CROWNPAK® CR(+) / CR(-)  色譜柱使用手冊(cè)

請(qǐng)?jiān)谑褂们白屑?xì)閱讀本《使用手冊(cè)》

  色譜柱描述  

所有色譜柱在出廠前都經(jīng)過檢測(cè)。檢測(cè)條件、結(jié)果及批號(hào)請(qǐng)查閱《出廠檢測(cè)報(bào)告》。

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注意

使用CROWNPAK® CR(+) / CR(-) 需特別注意溶劑使用限制。

如果在該色譜柱使用了不恰當(dāng)?shù)姆治鰲l件，會(huì)導(dǎo)致固定相性能的急劇下降或使色譜柱失去保留能力。必須要避免純有機(jī)溶劑的狀態(tài)。

在色譜柱連接到液相儀器前，整個(gè)液相體系（包括進(jìn)樣器及定量環(huán)）必須先用乙醇沖洗，然后再用100%蒸餾水沖洗。

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  手性識(shí)別機(jī)理  

CROWNPAK® CR(+) / CR(-) 的手性識(shí)別機(jī)理：在酸性條件下，樣品質(zhì)子化成銨離子（- NH3+），與冠醚形成可逆復(fù)合物。

冠醚柱用于分離氨基酸及手性中心上有伯胺基團(tuán)的化合物。

在CROWNPAK® CR(+)上，D-構(gòu)型氨基酸先出峰。

在CROWNPAK® CR(-)上，D-構(gòu)型氨基酸后出峰。

  操作條件  

說明：在HPLC 的壓力范圍內(nèi)操作，色譜柱填料穩(wěn)定。

           給定柱溫下，柱后壓與流速是線性關(guān)系。

① 推薦值可延長(zhǎng)色譜柱使用壽命，但色譜柱耐受至150Bar 的壓力。

② 柱后壓是指由色譜柱本身引起的壓力。其值為總壓（液相體系+色譜柱）與液相體系（不接色譜柱時(shí)）壓力之差。

③ 通常，溫度越低，分離度越大。尤其對(duì)親水性樣品。對(duì)一些疏水性樣品，在較低溫度下樣品會(huì)在色譜柱上強(qiáng)保留。

  操作過程  

！如果您想使用下述沒有提及的流動(dòng)相成分，請(qǐng)與我們聯(lián)系確認(rèn)。

A – 流動(dòng)相

本色譜柱需在以下的酸性條件下使用。

① · 通常流動(dòng)相的pH范圍：pH 1 ~ pH 2 (在pH 9以內(nèi)色譜柱是穩(wěn)定的)。

 · pH越低，分離度越好；但是色譜柱使用壽命也越短。選擇剛好能滿足分離的pH值能延長(zhǎng)色譜柱使用壽命。

 · 降低溫度也能增加手性選擇性。

 · 還可以使用其他的酸，比如硝酸和三氟乙酸。但一般推薦用高氯酸，在多數(shù)情況下，分離度更好，紫外吸收也很低。

② · 為縮短疏水性化合物的保留時(shí)間，可以在流動(dòng)相中加些甲醇（15%）。

        甲醇的比例超過15%或者使用其他有機(jī)相，極易損傷色譜柱填料。

B – 流動(dòng)相配制舉例

a) pH = 1.0

      稱取市售濃度為70%的高氯酸16.3g，用去離子水稀釋并定容至1L。

b) pH = 2.0

      量取100 mL pH 1.0的高氯酸水溶液，用去離子水稀釋并定容至1L。

c) pH = 1.5

      量取316 mL pH 1.0的高氯酸水溶液，用去離子水稀釋并定容至1L。

d) pH = 1.3

      量取500 mL pH 1.0的高氯酸水溶液，用去離子水稀釋并定容至1L。

說明：   - 流動(dòng)相需完全脫氣或用氦氣徹底純化。

             - 疏水性化合物在柱上的容量因子取決于樣品本身，比親水性化合物出峰時(shí)間晚很多。但樣品在色譜柱上出峰早且分離度小，可以通過降低流動(dòng)相的pH值（及柱溫）來優(yōu)化。

             - 盡管鉀鹽不會(huì)損傷色譜柱，但它會(huì)使柱子徹底失去手性選擇能力。我們使用流動(dòng)相及樣品時(shí)必須確保無鉀鹽。

  色譜柱保養(yǎng)/維護(hù)  

? 為延長(zhǎng)柱子使用壽命，強(qiáng)烈建議使用保護(hù)柱。

? 樣品必須用純水溶解，并經(jīng)接近0.5μm 孔徑的濾膜過濾。在配制樣品溶液時(shí)，如果甲醇的比例超過15%，也會(huì)對(duì)色譜柱造成不可逆的損傷。

? 樣品濃度太高，進(jìn)樣后會(huì)引起柱效降低。樣品濃度只需有10-8 ~ 10-7 mol，即能看到紫外響應(yīng)。

? 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，請(qǐng)用蒸餾水沖洗色譜柱。長(zhǎng)期保存(1 周以上)，用色譜柱保存溶劑水/甲醇(95/5 v/v)保存。

? 如果出現(xiàn)裂峰 (長(zhǎng)期使用后)，將色譜柱反接，用純水沖洗。但一般不建議反接沖洗。

  注意事項(xiàng)  

? 強(qiáng)堿性的添加劑或樣品溶液不能進(jìn)色譜柱，以免破壞色譜柱硅膠。

? 本《使用手冊(cè)》不適用于其他的大賽璐手性柱。

   嚴(yán)格按照《使用手冊(cè)》使用色譜柱，可延長(zhǎng)色譜柱使用壽命。

? 如您在手性柱使用中有任何疑問，請(qǐng)聯(lián)系大賽璐授權(quán)代理商-廣州綠百草。

  換算表  

? 色譜柱內(nèi)徑/流速

? 壓力

CROWNPAK® CR(+)分離氨基酸實(shí)例

嚴(yán)格按照《使用手冊(cè)》使用色譜柱，可延長(zhǎng)色譜柱使用壽命。

本《使用手冊(cè)》不適用于其他的大賽璐手性柱

若您在手性柱使用中有任何疑問，

請(qǐng)聯(lián)系 DAICEL/大賽璐代理商-廣州綠百草。